Abstract
Parallel artificial liquid membrane extraction (PALME) ble først publisert i 2013 og er en nyere type mikroekstraksjonsmetode. I PALME ekstraheres analytten fra en donorløsning i en bunnplate, gjennom en organisk væskemembran (SLM) og over i en akseptorløsning i akseptorplaten. Ekstraksjonen utføres i 96-brønnsformat, hvor det kan ekstraheres opptil 96 prøver samtidig. Kort tidsforbruk, lav mengde organisk løsemiddel og høy selektivitet er fordeler med denne teknikken. I denne oppgaven ble PALME anvendt som prøveopparbeidelsesmetode for 20 basiske legemidler med log P-verdi i området -1,0 - 6,0 og pKa-verdi i området 2,0 - 11,0. Den eksperimentelle delen besto av optimalisering fra vandige prøver. Metoden ble videre optimalisert fra plasma, og analyttene med ekstraksjonsutbytte over 40 % ble inkludert i metodeevaluering. I innledende eksperimenter ble ekstraksjon av analyttene utført fra vandige prøver for å undersøke optimale betingelser for donorløsningen, det organiske løsemiddelet brukt som SLM og akseptorløsningen. Det ble testet tre ulike bufferløsninger for donor (10 mM NaOH, 20 mM NH3, 100 mM fosfatbuffer), fire ulike organiske løsemidler (diheksyleter, dodecylacetat, pentylbenzen, 2-nonanon) og til slutt tre ulike akseptorløsninger (1 % HCOOH, 0,1 % HCOOH, 50 mM HCl). Analysen ble utført på væskekromatografi- massespektrometri (HPLC-MS). Eksperimentene med disse betingelsene ga følgende resultater; 100 mM fosfatbuffer som bufferløsning, diheksyleter som SLM og 0,1 % HCOOH som akseptorløsning ble vurdert som mest egnet for ekstraksjon. Disse ekstraksjonsbetingelsene ble benyttet for videre optimalisering med plasma. I eksperimentene med plasma ble donorløsningens sammensetning og ekstraksjonstid testet. Sammensetningene 100 mM fosfatbuffer: plasma (1:1), 100 mM fosfatbuffer (1:2), 200 mM fosfatbuffer: plasma (1:1), 300 mM fosfatbuffer: plasma (1:2) og 500 mM fosfatbuffer: plasma (1:1) ble testet. Videre ble det testet åtte ulike ekstraksjonstider (5, 10, 20, 30, 45, 60, 90 og 120 minutter) for å generere tidskurver og finne optimal ekstraksjonstid. Eksperimentene med disse betingelsene ga følgende resultater; sammensetningen 500 mM fosfatbuffer: plasma (1:1) ga gjennomsnittlig høyest ekstraksjonsutbytte for analyttene. En ekstraksjonstid på 120 min ga høyest gjennomsnittlig utbytte, og flest analytter med ekstraksjonsutbytte over 40 %. I den endelige metoden besto donorløsningen av 500 mM fosfatbuffer: plasma (1:1), SLM av diheksyleter og akseptorløsningen av 0.1% HCOOH med en ekstraksjonstid på 120 min. Metodeevaluering innebar evaluering av linearitet, presisjon og nøyaktighet, minste detekterbare konsentrasjon (MDK) og minste kvantifiserbare konsentrasjon (MKK). Standardkurvens r2- verdier var i området 0,847 - 1. MKK var mellom 0,07 og 13,5 nM. MDK var i området 0,02 og 4,09 nM. Fra metodeevalueringen oppfylte 8 av 11 analytter kravene for linearitet, presisjon og nøyaktighet. Det kan tenkes at videre optimalisering av ekstraksjonsparamtere også muliggjør metodens bruk for kvantifisering for resten av analyttene.