Abstract
Bakgrunn: Etter en nyretransplantasjon er immunsupprimerende behandling helt nødvendig, og mykofenolatmofetil (MMF) inngår som en del av behandlingen og doseres morgen og kveld. Mykofenolat (MPA) glukuronideres til hovedmetabolitten mykofenolatglukuronid (MPAG). En circadisk rytme er en intern, biologisk klokke som påvirkes av jordens rotasjon, og kan regulere blant annet hormoner, søvn, hjertefrekvens og kroppstemperatur. Legemidler påvirkes også av circadiske rytmer, og chronofarmakokinetikk omhandler hvordan farmakokinetikk (PK) påvirkes av ulike fysiologiske funksjoner i kroppen som kan variere med tiden på dagen. Hensikten med denne oppgaven var todelt: å validere en UHPLC-MS/MS-metode for analyse av MPA og MPAG i plasmaprøver og deretter å benytte metoden til å analysere plasmaprøver fra pasienter inkludert i DagNatt-studien. Videre skulle påvirkningen av circadisk variasjon på farmakokinetikken til MPA og MPAG hos nyretransplanterte pasienter inkludert i den tidligere utførte DagNatt-studien undersøkes. Metode: Det ble tatt utgangspunkt i en allerede utviklet UHPLC-MS/MS metode for å kvantifisere MPA og MPAG i plasmaprøver. Metoden ble validert etter kravene i EMAs retningslinjer til bioanalytiske analyser. Nyretransplanterte pasienter i en tidlig fase etter transplantasjon som ble behandlet med takrolimus, prednisolon og MMF ble inkludert i DagNatt-studien. Pasientene gjennomførte to påfølgende 12-timers MPA PK-undersøkelser i løpet av 24 timer, etter henholdsvis morgen- og kveldsdosering av MMF. Den validerte metoden ble benyttet til å analysere plasmaprøver fra pasientene i DagNatt-studien, og forskjellen i farmakokinetikk mellom dag og natt hos både fastende og ikke-fastende pasienter ble undersøkt. Resultater: Metodevalideringen for MPA og MPAG ga tilfredsstillende linearitet, nøyaktighet, presisjon, stabilitet og selektivitet. Ingen matriks- eller carryover-effekter ble observert, og metoden ble kryssvalidert og det viste at metoden samsvarte med metoden som brukes i klinisk rutine ved Oslo universitetssykehus – Rikshospitalet. Totalt 30 pasienter (22 menn, 8 kvinner) ble inkludert i de farmakokinetiske analysene, og delt i grupper med fastende (n=11) og ikke-fastende (n=35) pasienter. MPA utviser circadisk variasjon: det ble observert en lavere systemisk eksponering (AUC0-12) etter kveldsdosering av MMF hos både fastende (32,9 ± 8,9 vs. 39,9 ± 7,8 mg*t/l, p = 0,037) og ikke-fastende pasienter (33,2 ± 9,1 vs. 39,8 ± 11,2 mg*t/l, p = 0,00002). Tmaks var lengre om natten hos fastende (2,5 (0,6 - 11,5) timer vs. 0,9 (0,5 - 2,6) timer, p = 0,042) og kortere om natten for ikke-fastende pasienter (1,5 (0,5 – 6,3) timer vs. 2,0 (0,6 – 9,2) timer, p = 0,031). For MPAG ble det kun observert circadisk variasjon i ikke-fastende pasienter med en signifikant lavere systemisk eksponering etter kveldsdosering av MMF enn etter morgendosering (452 ± 143 vs. 512 ± 176 mg*t/l, p = 0,000125). Konklusjon: Valideringen av metoden ga tilfredsstillende resultater, og oppfylte kravene i EMAs retningslinjer. Både MPA og MPAG utviser circadisk variasjon med lavere systemisk eksponering etter kveldsdosering av MMF. Forskjellen i farmakokinetikk mellom dag og natt er derimot ikke av klinisk relevans, og det anses ikke å være et behov for å dosere MMF ulikt morgen og kveld.
Background: Immunosuppressive treatment is a necessity after a kidney transplant, and mycophenolate mofetile (MMF) is administrated as a morning- and evening dose as a part of the treatment. Mycophenolate (MPA) is glucuronidated to the main metabolite mycophenolate glucuronide (MPAG). A circadian rhythm is an internal, biological clock that is affected by the earth’s rotation, and it can affect hormones, sleep, heartrate and body temperature. Drugs are also affected by circadian rhythms, and chronopharmacokinetics involves the study of how pharmacokinetics are affected by different physiological body functions that can vary throughout the day. The aims of this study were to validate a UHPLC-MS/MS-method for quantification of MPA and MPAG in plasma samples, and to use this method to analyze plasma samples from the previous conducted DayNight-study. In addition, the influence of circadian variations on the pharmacokinetics of MPA and MPAG in kidney transplant patients included in the study, was also investigated. Method: A previosly developed UHPLC-MS/MS-method for quantification of MPA and MPAG in plasma samples was validated according to EMA’s guideline on bioanalytical method validation. Patients in the early phase after transplantation, who received treatment consisting of tacrolimus, prednisolone and MMF, were included in the DayNight-study. The patients underwent two successive 12-hour pharmacokinetic investigations of MPA within 24 hours, after administration of MMF in the morning and in the evening. The validated method was used for analyzing plasma samples for patients included in the DayNight-study, and pharmacokinetic differences between day and night in both fasting and non-fasting patients were investigated. Results: The method validation showed satisfying linearity, accuracy, precision, stability and selectivity. No matrix- or carryover effects were observed, and the method was cross-validated, and agreement with the method used in clinical routines at Oslo University Hospital – Rikshospitalet was demonstrated. A total of 30 patients (22 men, 8 women) was included in the pharmacokinetic analyzes, and divided into groups of fasting (n=11) and non-fasting (n=35) patients. MPA shows circadian variation: a lower systemic exposure (AUC0-12) after the MMF evening dose was shown in both fasting (32,9 ± 8,9 vs. 39,9 ± 7,8 mg*h/L, p = 0,037) and non-fasting (33,2 ± 9,1 vs. 39,8 ± 11,2 mg*h/L, p = 0,00002) patients. Tmax of MPA was delayed after the evening dose of MMF in fasting patients (2,5 (0,6 - 11,5) hours vs. 0,9 (0,5 - 2,6) hours, p = 0,042) and appeared earlier in non-fasting patients (1,5 (0,5 – 6,3) hours vs. 2,0 (0,6 – 9,2) hours, p = 0,031). MPAG showed a circadian variation only in non-fasting patients with a significantly lower systemic exposure after an MMF evening dose (452 ± 143 vs. 512 ± 176 mg*h/L, p = 0,000125). Conclusion: The validation of the method showed satisfying results, and met the criteria of EMA’s guidelines. Both MPA and MPAG show circadian variation with lower systemic exposure after evening doses of MMF. The pharmacokinetic differences between day and night are not considered clinically relevant, and there seems to be no need for a different dosage of MMF between the morning and the evening.