Abstract
En elektromembranekstraksjon (EME)-sonde ble utviklet og koblet direkte til elektrosprayionisasjon-massespektrometri (ESI-MS). Systemet ble brukt til in vitro metabolismestudier av legemidlene hydroksyzin og vortioksetin med formål å ekstrahere de respektive zwitterioniske metabolittene cetirizin og Lu AA34443. Metabolismeløsningen (donorfasen) bestod av fosfatbuffer (pH 7,4), rottelevermikrosomer (RLM), β-nikotinamid adenin dinkleotid 2´-fosfat redusert tetranatrium salthydrat (NADPH) og legemiddelløsning (enten hydroksyzin eller vortioksetin). Metabolismeløsningen ble trukket opp gjennom EME-sonden og blandet med make-up væske via et PEEK-kryss. Metabolismereaksjonen ble kontinuerlig monitorert og det ble dannet en metabolismeprofil for legemidlene. For ekstraksjon av legemidlene og metabolittene ble det benyttet en organisk væskemembran (SLM) bestående av 2-nitrofenyloktyleter (NPOE) eller 30 % (v/v) trifenylfosfat (TPP) i NPOE. Ekstraksjonen ble drevet av et elektrisk spenningsfelt på 400 V over membranen som ga opphav til elektrokinetisk migrering av positivt ladede forbindelser over membranen. Positivt ladede forbindelser ble ekstrahert over SLM og inn i akseptorfasen (10 mM maursyre) som var i bevegelse og direkte koblet til ESI-MS for kontinuerlig monitorering av legemiddelmetabolisme. Formålet med make-up væske som bestod av maursyre (1 M eller 2,5 M) var å protonere karboksylsyre-gruppen på de zwitterioniske metabolittene for å gjøre dem positivt ladet slik at de ble ekstrahert. Mens metabolittene ikke ble ekstrahert ved pH 7,4 ble det vist at metabolittene effektivt kunne ekstraheres ved å surgjøre metabolismeløsningen før den nådde SLM. Ekstraksjonsparametere som SLM-sammensetning, ekstraksjonsspenning og hastighet og syrekonsentrasjon av make-up væsken ble optimalisert for best mulig signalintensitet av legemidlene og metabolittene. Fordi EME-sondesystemet gjorde det mulig å modifisere pH i metabolismeløsningen i forkant av ekstraksjonen uten å påvirke pH i reaksjonskammeret, kan systemet potensielt bli brukt generelt til kontinuerlige ekstraksjoner som krever pH-betingelser forskjellige fra prøveløsningen.