Sammendrag
Bakgrunn:
Bakgrunnen for oppgaven var at Enhet for cellesignalering (CAST; Cancer Stem Cell Innovation Center, Avdeling for Mikrobiologi, Oslo Universitetssykehus, Rikshospitalet, Forskningsparken), hadde utviklet en hemmer av Wnt/β-catenin-signalering (“TI007”) som utøvde sin effekt ved hemming av tankyrase (TNKS). Forskningsgruppen ønsket å kartlegge TI007s kapasitet til å påvirke nøkkelparametre i Wnt-signalveien hos ulike kolorektale kreft (CRC)-cellelinjer, samt utføre metabolomstudier for å forstå på hvilke måter behandlingen påvirket nivået av metabolitter i cellene.
Hensikt:
TNKS-hemmere er vist å påvirke nøkkelparametre i Wnt-signalveien som AXIN2-protein og β-catenin, samt cellevekst. Hensikten med oppgaven har først vært å kartlegge og karakterisere TI007s kapasitet til å påvirke nevnte nøkkelparametre i et panel av ulike CRC-cellelinjer. Videre skulle et utvalg av responsive cellelinjer velges ut, og metabolom-analyser skulle bli utført ved Gruppen for Bioanalytisk kjemi for å identifisere forskjeller i metabolittprofil mellom kontrollgrupper og behandlede grupper. Kandidatcellelinjer for CAST-gruppens fremtidige xenograftforsøk i mus skulle også velges ut.
Metoder:
I del 1 ble metodene Western blot, real-time revers transkripsjon polymerase kjedereaksjon (real-time RT-PCR) og IncuCyte for måling av cellevekst, anvendt for kartlegging av TI007s kapasitet til å påvirke nøkkelparametre i et panel av CRC-cellelinjer. I del 2 ble metabolom-analyser utført ved hjelp av kjernemagnetisk resonans (NMR)-spektroskopi.
Resultater:
Western blot-analyser viste en doseavhengig økning av AXIN2-nivået og doseavhengig reduksjon β-catenin i flere av de undersøkte cellelinjene. IncuCyte-målinger viste en tendens til prosentvis reduksjon av cellevekst i forhold til DMSO-kontrollen, ved flere av cellelinjene. Reduksjon i AXIN2-ekspresjon, som indikerte redusert aktivitet av Wnt-signalveien, ble også vist i to undersøkte cellelinjer. En enkel metode for prøveopparbeidelse av CRC-celler for metabolomstudier med NMR-spektrometri ble utviklet. Utvalgte cellelinjer ble bestemt å være COLO320DM, SW480, HCT-15 og RKO, og i disse ble få betydelige forandringer funnet i metabolomet etter behandling med TI007 i 24 timer.
Konklusjon:
TI007 så ut til å påvirke viktige nøkkelparametre ved Wnt-signalveien i CRC-cellelinjer. Oppgaven har gitt publiseringsverdige resultater, samt grunnlag for utvelgelse av kandidatcellelinjer for CAST-gruppens fremtidige xenograftforsøk i mus. Oppgaven har også gitt grunnlag for videre metabolomstudier av CRC-celler. For videre studier av metabolomet vil flere forsøk være nødvendig for mer kvantitative slutninger, samtidig som LC-MS bør vurderes komplementært for bedre følsomhet.