Elektromembranekstraksjon av peptider fra vandige prøver

Abstract

I denne oppgaven har det blitt arbeidet med videreutvikling av elektromembranekstraksjon (EME) som prøveopparbeidelsesmetode av peptider fra vandige prøver. Sju modellpeptider ble ekstrahert fra 1000 µL vandig, sur prøve (donorfase) som oftest bestående av 1 mM HCl, gjennom en kunstig væskemembran og over til 25 µL vandig, sur løsning (akseptorfase) som oftest bestående av 50 mM HCl. Negativ elektrode (katode) og positiv elektrode (anode) ble plassert i henholdsvis akseptor- og donorfasen, og den pålagte spenningen over væskemembranen var hoveddrivkraften for ekstraksjonen av peptidene. Det ble hovedsakelig påsatt spenning på 10 V, ekstraksjonstid var normalt 5 minutter og systemet ble satt til risting ved 900 rpm. Etter endt ekstraksjon ble akseptorfase fortynnet i 1:1-forhold og satt til analyse på et high performance liquid chromatography (HPLC)-instrument.

Hovedfokuset i dette arbeidet har vært å utvide forståelsen for hva som skjer under EME av peptider, å forsøke å finne måter å øke ekstraksjonsutbyttene på, samt å undersøke mulig selektivitet i systemet. Forsøk som er utført, omfatter ekstraksjoner med ulike sammensetninger av organiske faser i væskemembranen, forsøk med ulik ekstraksjonstid på opp til 45 og 75 minutter, tilsetting av konkurrerende kationer i donorfasen, endring av akseptorfase underveis i ekstraksjonen, forsøk med ulik påsatt spenning, forsøk med ulik akseptorfase og forsøk med ulike pH-verdier i donorfasen.

Selv om alle nevnte fremgangsmåter ut ifra teorien var antatt å påvirke ekstraksjonskinetikken i positiv retning, har ingen vist stor forbedring av ekstraksjonsutbytte, med unntak av økt ekstraksjonstid, der resultatet var at mange av peptidene når steady-state etter omtrent 20 minutters ekstraksjon. Det har heller ikke blitt rapportert klare selektivitetstrender i systemet.

Dette arbeidet har økt forståelsen av ekstraksjonskinetikken i EME av peptider og vil være med å danne det videre forståelsesgrunnlaget for fremtidig arbeid.