Hide metadata

dc.date.accessioned2013-03-12T08:39:16Z
dc.date.available2013-03-12T08:39:16Z
dc.date.issued2011en_US
dc.date.submitted2011-12-20en_US
dc.identifier.citationEngedahl, Guro Elisabeth. Uttrykk av glypikanvarianter i MDCK II-celler. Masteroppgave, University of Oslo, 2011en_US
dc.identifier.urihttp://hdl.handle.net/10852/11466
dc.description.abstractEpitelcellelinjen ”Madin-Darby canine kidney” (MDCK) er en velstudert polarisert cellelinje som danner tette cellelag med separate apikale og basolaterale membrandomener, som ved hjelp av polarisert transport av nysyntetiserte og resirkulerende proteiner og proteoglykaner (PGer) opprettholder de ulike membransammensetningene. Det er tidligere studert syntese og sortering av sekretoriske og transmembrane proteiner i forskningsgruppen, og det var derfor ønskelig å se nærmere på heparansulfatproteoglykanet (HSPGet) glypikan, som er kovalent bundet til den ekstracellulære siden av plasmamembranen (PM) via et glykosylfosfatidylinositol (GPI)-anker. Hos mennesker består glypikanfamilien av seks medlemmer (glypikan 1-6), og uttrykkes hovedsakelig under embryonal utvikling hvor de er involvert i cellesignalering. I denne oppgaven er det arbeidet med glypikan 1. Det ble laget tre ulike glypikanvarianter for å få mer innsikt i syntese og sortering i den sekretoriske vei, og grønt fluorescerende protein (GFP) ble satt inn i alle de tre glypikanvariantene for å kunne studere cellene levende i konfokalmikroskopet. Glypikanvariantene ble stabilt transfektert inn i MDCK II-celler for å undersøke membranlokaliseringen til full-lengde glypikan i tillegg til å sammenligne glykosaminoglykan (GAG)-sammensetningen og sulfateringsgraden av full-lengde glypikan med en sekretorisk glypikanvariant. For å kunne studere prosesser tidlig i den sekretoriske vei, ble en glypikanvariant med et være-i-ER-signal lysin-asparaginsyre-glutamat-leucin (KDEL)-sekvens helt C-terminalt laget, for å se om dette påvirker syntese og sortering av PGer. Membranbiotinylering av full-lengde glypikan dyrket på filter, viste at nesten all full-lengde glypikan befant seg inne i cellen og at kun en liten fraksjon kom til celleoverflaten. Den sekretoriske glypikanvarianten ble ikke skilt ut av cellen som et sekretorisk protein, men befant seg også inne i cellen, og det ble ikke funnet GAG-kjeder på de to glypikanvariantene ved enzymatisk degradering. Både full-lengde og sekretorisk glypikanvariant lignet på glypikanvarianten med KDEL-sekvens, som befinner seg tidlig i den sekretoriske vei, og ved enzymatisk behandling ble det bekreftet at alle tre glypikanvariantene befinner seg før medial-Golgi, i den sekretoriske vei. En full-lengde glypikanvariant uten GFP ble laget for å undersøke om GFP påvirket sorteringen av glypikanvarianter med GFP, og dette ble bekreftet da full-lengde glypikanvariant uten GFP ble modifisert med heparansulfat (HS) GAG-kjeder, som viser at PGet har gått gjennom Golgi-apparatet.nor
dc.language.isonoben_US
dc.titleUttrykk av glypikanvarianter i MDCK II-celleren_US
dc.typeMaster thesisen_US
dc.date.updated2012-02-24en_US
dc.creator.authorEngedahl, Guro Elisabethen_US
dc.subject.nsiVDP::473en_US
dc.identifier.bibliographiccitationinfo:ofi/fmt:kev:mtx:ctx&ctx_ver=Z39.88-2004&rft_val_fmt=info:ofi/fmt:kev:mtx:dissertation&rft.au=Engedahl, Guro Elisabeth&rft.title=Uttrykk av glypikanvarianter i MDCK II-celler&rft.inst=University of Oslo&rft.date=2011&rft.degree=Masteroppgaveen_US
dc.identifier.urnURN:NBN:no-30019en_US
dc.type.documentMasteroppgaveen_US
dc.identifier.duo147475en_US
dc.contributor.supervisorKristian Prydz, Heidi Tveiten_US
dc.identifier.bibsys120394286en_US
dc.identifier.fulltextFulltext https://www.duo.uio.no/bitstream/handle/10852/11466/1/Engedahl_GuroE_Masteroppgave.Word2007.pdf


Files in this item

Appears in the following Collection

Hide metadata