Studier av interaksjonen mellom oncoproteinet c-Myb og kromatin remodelleringsfaktoren Mi2.

Abstract

Sammendrag: I en celle foregår det tusenvis av forskjellige prosesser og interaksjoner til enhver tid, og regulering av genaktivitet har stor betydning i dette samspillet. Mange faktorer er med på å regulere transkripsjon, og blant dem finnes også transkripsjonsfaktoren c-Myb. c-Myb er involvert regulering av gener som har betydning for proliferering (cellevekst), differensiering (modning) og apoptose (programmert celledød). Faktorer som er involvert i regulering av gener virker sammen i et komplisert nettverk av proteiner. Protein-protein interaksjoner spiller derfor en avgjørende rolle for de fleste biologiske prosesser. For å kunne forstå noe av dette samspillet må man først finne ut hvilke faktorer som faktisk samarbeider eller direkte regulerer hverandre. For å identifisere nye interaksjonspartnere til c-Myb utførte Øyvind Dahle en tohybrid screening i gjær. Resultatet var fem nye potensielle interaksjonspartnere til c-Myb. En av disse var Mi2, eller nærmere bestemt det C-terminale domenet av dette proteinet, og det er c-Mybs interaksjon med dette proteinet som er studert i denne oppgaven. Det c-Myb-interagerende domenet av Mi2 har vi kalt MID, for Myb interacting domain . Mi2 er en kromatin remodelleringsfaktor assosiert med repressorkomplekset NuRD. Målet med denne oppgaven var å verifisere og karakterisere Mi2 som interaksjonspartner til c-Myb. Dette ble gjort ved in vitro forsøk. Først ble interaksjonen mellom c-Myb og MID bekreftet og lokalisert til FAETL-domenet av c-Myb. Interaksjonen med MID var like sterk for en onkogen variant av c-Myb (AMV v-Myb) som for c-Myb. Mutasjoner som blokkerer for sumoylering av c-Myb gir økt transaktivering. Disse mutasjonene i c-Myb påvirket ikke interaksjonen mellom MID og c-Myb. Videre ble interaksjonen med FAETL-domenet til c-Myb også bekreftet for Mi2 1096. Mi2 1096 er en forkortet versjon av Mi2, men inneholder alle predikerte funksjonelle domener. Mi2 1096 interagerte også med DNA-bindingsdomenet av c-Myb. En funksjonell konsekvens av interaksjonen ble også vist. c-Mybs DNA-bindingsaktivitet ble hemmet av MID in vitro. MID hadde imidlertid ingen påvirkning på c-Mybs binding til DNA når denne bindingen først var blitt dannet, og MID påvirket heller ikke bindingen av et isolert DBD av c-Myb til DNA. c-Myb er tradisjonelt kjent som en transkripsjonsaktivator, selv om enkelte tilfeller av repressjon er observert. En interaksjon med et repressorkompleks som NuRD vil kunne forklare hvordan c-Myb kan fungere som repressor. Fremtidige in vivo studier vil vise i hvilke biologiske prosesser denne interaksjonen har betydning.